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C18液相色谱柱的使用及维护方法

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产品简介
C18液相色谱柱的使用及维护方法 在选择色谱柱之前,先多了解自己的样品和杂质,他们的类型结构、极性、酸碱性、分子量大小等等, 1.样品是极性的且弱酸性的;就可以选择C18在100%酸性水溶液条件下检测,即要选择承受100%纯水且对极性化合物保留很好的色谱柱 2. 如果样品极性太强,或酸性太强;可以选择CN,NH2,或硅胶柱,HILIC(亲水色谱),也有使用C18+强阴离子对试剂或强阴离子交换色谱柱(缺点是离子对试剂平衡时间长,对流动相pH要求比较精密,否 则很难重复实验,另外离子对试剂很难洗下来,基本上用了离子对的色谱柱就不能再用于其它实验) 3. 若样品是碱性的;可选择高纯硅胶柱(高纯硅胶缺少金属杂质,且硅胶端基封尾)或一些经过修饰的C18柱(如极性嵌入技术或碱去活技术等),他们都会减少碱性化合物的拖尾,一般会选择中性或偏碱的条件下做,因为这样可增加碱性样品的保留。 4.如果碱性化合物的极性太强,或碱性太强;可以选择宽pH的C18色谱柱在高pH值检测(优点是方法开发简单,缺点是目前实 现这一技术的色谱柱品牌比较少,价格也高)或者选用HILIC色谱柱(硅胶柱在反相条件下使用,这也是很经典的检测碱性样品的方法)选择强离子交换柱(缺点 是不能用来分析其它样品,对流动相pH要求比较精密,否则很难重复实验)也有使用C18+强阴离子对试剂或强阴离子交换色谱柱。   C18柱是一种常用的反相色谱柱,它以十八烷基硅烷键合硅胶为填料,因此有较高的碳含量和更好的疏水性,对各种类型的生物大分子有更强的适应能力,适用范围较广,是高效液相色谱仪分析中首选的色谱柱类型。 在使用液相色谱C18仪柱过程中,须注意以下事项: 1、新C18色谱柱在使用前,须先用甲醇或乙腈试剂以20倍柱体积低流速冲洗,作用是使固定相能充分润湿、碳链舒展彻底,使色谱柱的性能达到最好状态。具体操作是,将配制好65%的乙腈/水冲洗后,把色谱柱进口端连接在色谱仪上,出口端放空(不可连上检测器,以免污染了检测器),以0.1ml/min~0.5ml/min的低流速将色谱柱中的清稀溶液吹干,过20分钟后再接上检测器,以1.0ml/min的流速,继续冲洗2~8小时; 2、液相色谱仪检测分析样品完毕后,须冲洗色谱柱。尤其是流动相中含有酸或盐时,需将色谱柱中的酸或盐冲洗干净,通常建议用10%甲醇水冲洗20倍柱体积;  3、若色谱柱处于长期闲置状态时,要将色谱柱彻底冲洗,建议冲洗3-4小时以上,最后保存在纯有机试剂或高比例的有机试剂溶液(如90%甲醇水)中;  4、由于C18柱的固定相疏水性较强,在使用过程中尽量不要使用高水相条件,若水相比例过高易引起固定相疏水塌陷,引起柱效迅速下降,甚至造成不可逆的负面影响;由于碳载量高,表现尤为明显,建议使用过程中水相比例不超过90%; 5、色谱柱压力升高、柱性能下降:通常为色谱柱被污染,对色谱柱进行再生处理可恢复部分柱效;   6、色谱柱压力骤升:通常由盐析出或筛板堵塞引起,若是盐析出,用10%甲醇水低流速冲 洗至压力恢复即可;若判断并非盐析出,以纯甲醇或10%甲醇水为流动相反冲色谱柱(将色谱柱反接,不接检测器),若反冲半小时仍无效果则说明反冲无效,需寻找其他原因。   本文地址:www.tetvoc.com 公司电话:027-62436457、58、59 传真电话:027-88773157 公司邮?a class="__cf_email__" href="/cdn-cgi/l/email-protection" data-cfemail="ca2e6970beafbebca5a98afbf8fce4a9a5a7">[email protected] QQ:656658729 公司地址:湖北省武汉市江夏区光谷8号工坊1-3-601 

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